水中輪狀病毒實(shí)時(shí)定量PCR外標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建
| 論文類型 | 基礎(chǔ)研究 | 發(fā)表日期 | 2008-02-01 |
| 來(lái)源 | 環(huán)境科學(xué) | ||
| 作者 | 胡秀華,何苗,劉麗,李丹,施漢昌 | ||
| 關(guān)鍵詞 | 輪狀病毒;克隆;標(biāo)準(zhǔn)品;實(shí)時(shí)熒光定量PCR | ||
| 摘要 | 采用細(xì)胞培養(yǎng)和T2A 克隆技術(shù),在輪狀病毒主要結(jié)構(gòu)蛋白VP7 基因序列上設(shè)計(jì)合成引物,經(jīng)PCR 擴(kuò)增后將特異性產(chǎn)物連接入pGEM2T2easy 載體中,經(jīng)過(guò)酶切鑒定和測(cè)序分析獲得輪狀病毒cDNA 標(biāo)準(zhǔn)品. 利用常規(guī)PCR 和實(shí)時(shí)定量PCR 方法對(duì)所獲得的cDNA 標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行特異性、穩(wěn)定性和重復(fù)性指標(biāo)的檢驗(yàn). 結(jié)果表明,利用此標(biāo)準(zhǔn)品制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線具有較高的擴(kuò)增效率和良好的線性關(guān)系(斜率為- 31353 , R2 = 01995) ;實(shí)時(shí)定量PCR 熔解曲線分析表明,溫度在81 ℃±015 ℃的PCR 產(chǎn)物是 | ||
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